بررسی بیان ژن کیتیناز کلاس (1)در گیاه خربزه وحشی تلقیح شده با پاتوژن قارچی فوزاریوم اکسیسپوریوم ملونیس

یکی از پاتوژن های قارچی که ریشه گیاهان خانواده کدوییان را مورد حمله قرار داده و موجب صدمه به گیاهان می شود، قارچ فوزاریوم اکسیسپوریوم می باشد، این تحقیق به منظور بررسی تغییرات در بیان ژن کیتیناز گیاه خربزه وحشی(cucumis melo var. agrestis) در پاسخ به تنش پاتوژن ریشه ای فوزاریوم(fusarium oxysporum f.sp. melonis) انجام شد. بذرهای خربزه وحشی پس از ضدعفونی در شرایط کنترل شده گلخانه ای کاشته و رشد داده شدند. گیاهچه های 10-15 روزه از خاک خارج شده و ریشه ی آنها به مدت 1 دقیقه در مخلوط سوسپانسیون اسپور با غلظت 106اسپور در میلی لیتر فرو برده شده و مجدداً در گلدان های محتوی خاک استریل کشت شد و در شرایط قبلی رشد کردند. در مرحله بعد، از مراحل مختلف رشدی(1،2،4،6 و8 روز پس از تلقیح) نمونه گیری از بافت گیاهی انجام شد و استخراج rnaکل با محلول ترایزول انجام شد. پس از استانداردسازی سنتز رشته cdna از نمونه های rna انجام شد. cdnaهای سنتز شده برای انجام real-time pcr و بررسی بیان ژن مورد استفاده قرار گرفتند. ارزیابی کمی بیان ژن کیتیناز با استفاده از روش مقایسه چرخه آستانه (cycle threshold) انجام و تغییر بیان ژن در مقایسه با ژن ثابت یوبی کوئیتین c (ubc) انجام شد. نتایج نشان داد که بیشترین افزایش در بیان ژن کیتیناز در حدود 23 برابر حالت کنترل مشاهده شد. این حداکثر بیان 8 روز پس از تلقیح با پاتوژن مشاهده شده است. نتایج شاهد نیز بیانگر افزایش بیان ژن بوده که احتمالاً به دلیل تحریک پروموتر ژن کیتیناز در اثر تنش های زخم بوده است. داده های این پژوهش بیانگر واکنش عمومی این ژن در برابر تنش های مکانیکی و زیستی روی گیاه بوده که بیانگر قابلیت بالای پیشبر این ژن برای طراحی و مهندسی گیاهان تراریخت برای واکنش سریع به تنش های مشابه می باشد.